整合素α4在美洲大蠊提取物黏糖氨酸抗肝纤维化中的作用

摘要

目的本研究基于黏糖氨酸(SSAA)在大鼠中的抗肝纤维化作用,研究整合素α4(ITGA4)在肝纤维化中的作用机制。方法大鼠腹腔内注射CCl_(4)诱导肝纤维化模型,在此基础上使用秋水仙碱或SSAA低、中、高剂量进行干预,以空白对照组、SSAA组作为对照。实验干预12周后,收集大鼠血清、肝脏标本,检测大鼠血清ALT、AST水平,HE染色、天蓝猩红染色观察肝组织病理情况;实时荧光定量PCR检测肝组织ITGA4、整合素β1(ITGB1)、TGFβ1、α-SMA、TIMP2的转录水平;Western Blot检测ITGA4、ITGB1、TGFβ1、α-SMA、MMP2、TIMP1、TIMP2的相对蛋白表达;免疫组化观察TGFβ1、α-SMA蛋白表达。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果CCl_(4)模型组中AST、ALT显著升高,秋水仙碱或SSAA低、中、高剂量干预后能降低AST、ALT水平,各组与CCl_(4)模型组相比差异均有统计学意义(P值均<0.05)。CCl_(4)模型组中的HE染色和天蓝猩红染色结果显示肝小叶结构紊乱、胶原纤维增多,秋水仙碱或SSAA低、中、高剂量干预后肝小叶结构得到改善。CCl_(4)模型组中的ITGA4、TGFβ1、α-SMA和TIMP2各指标转录水平均显著高于其余各组,秋水仙碱或SSAA干预后能降低各因子转录水平,与CCl_(4)模型组相比差异均有统计学意义(P值均<0.05)。CCl_(4)模型组中的ITGA4、TGFβ1、α-SMA、TIMP2和TIMP1蛋白表达高于其余各组,MMP2蛋白表达低于其余各组,在秋水仙碱或SSAA干预后均能抑制ITGA4、TGFβ1、α-SMA、TIMP2、TIMP1表达,促进MMP2表达。免疫组化结果提示CCl_(4)模型组的TGFβ1、α-SMA的表达显著高于其余各组,秋水仙碱或SSAA干预后均能抑制表达。SSAA高剂量组在降低转氨酶、改善肝小叶结构和抑制致肝纤维化因子蛋白表达上效果最显著。结论肝脏中ITGA4的高表达与肝纤维化的发生相关,与TGFβ1、α-SMA表达升高一致,抑制ITGA4表达可为抗肝纤维化提供更多治疗靶点,同时拓展了SSAA的抗肝纤维化作用机制。