钙离子通道基因TRPC6转染HEK293电生理特性研究

摘要

目的 建立TRPC6基因在HEK293细胞稳定表达的方法,并对TRPC6通道的电生理特性进行研究,以排除其他因素的影响而更加准确地研究该单独的离子通道的特性.方法 应用TRPC6基因转染于不表达TRPC6离子通道的HEK293细胞,给予该离子通道特异性激动剂二酰基甘油类似物OAG(1-oleoyl-acetyl-sn-glycerol);应用尼福地平阻断高阈值Ca2+通道,细胞内液成分含Cs+以阻断K+通道;全细胞膜片钳记录TRPC6通道电流在HEK293细胞的表达.钳制电位在-50 mV.采用Ramp刺激方式(斜坡电压):间隔15 s,连续80个刺激,记录20 min.结果 HEK293细胞电流为171.8 pA,给予TRPC6离子通道特异性激动剂OAG,测得HEK293细胞表达的TRPC6通道电流为2920.98 pA,膜电流明显增大,说明TRPC6离子通道已成功地转染到HEK293细胞上.Ramp方式刺激HEK293细胞显示,在灌流液中给予激动剂OAG后,从3 min开始,电流逐渐增大,到5 min左右达最大值,经洗脱后又逐渐下降.在灌流液中给予尼福地平,电流幅度未下降,在227.9～998.8 pA之间.未加激动剂OAG时,从正常HEK293细胞记录到的TRPC6离子通道电流较小,约为171.8 pA.给予TRPC6离子通道特异性激动剂OAG,记录的该通道电流增加,可达2920.98 pA.HEK293细胞转染TRPC6后给予尼福地平及激动剂OAG,离子通道电流为3137.16 pA,未能阻断Ca2+电流.结论 正常足细胞TRPC6通道的电流较小,给予TRPC6离子通道特异性激动剂OAG,可激活该通道从而增加TRPC6电流.尼福地平不能阻断转染到HEK293细胞上的TRPC6通道电流.