PCR-RDB技术快速检测儿童急性呼吸道感染DNA病毒的研究

摘要

目的建立多重PCR反向斑点杂交方法（PCR-RDB）技术快速检测儿童急性呼吸道感染DNA病毒,以便及时监测并快速诊断急性病毒性呼吸道感染。方法参照国家生物技术信息中心（NCBI）数据库病毒核酸序列设计多重PCR引物和探针,将特异的寡核苷酸探针固定于尼龙膜上。利用多重PCR对人博卡病毒（hhBOV）、KI多瘤病毒（KI）、腺病毒（AdV）、WU多瘤病毒（WUPyV）、人细小病毒B19（HPVB19）等5种DNA病毒进行扩增,扩增产物变性后与各特异性探针进行杂交、显色并分析结果,并对其敏感性、特异性进行测试。同时通过反向斑点杂交检测108例临床标本的多重PCR产物,并与培养法结果做对比分析。结果建立的多重PCR-RDB方法各特异探针只相应扩增产物杂交,与其他病原体无交叉反应,敏感性达1 CFU。108例临床咽拭子标本PCR-RDB方法共筛选出阳性37例（34.26%）,高于临床常规检测方法的30例（27.78%）。结论应用多重PCRRDB技术可简便、快速、准确地检测儿童急性呼吸道感染DNA病毒,具有很好的临床应用前景。