环形泰勒虫TA13815蛋白的原核表达及反应原性分析

摘要

为研究环形泰勒^(Theileria annitZata)TA13815蛋白功能,对环形泰勒虫虫体蛋白TA13815基因的核甘酸序列及编码蛋白的氨基酸序列进行生物信息学分析,构建pET30a-TA13815重组表达载体,并对其进行原核表达及反应原性分析。SDS-PAGE结果显示,蛋白的分子质量大约为29.663 ku,主要以包涵体形式表达,条带位置显示蛋白的分子质量比预期大,蛋白可能存在翻译后修饰。通过qPCR分析环形泰勒虫3个不同发育阶段,结果显示TA13815 mRNA在3个阶段均有表达,且在裂殖体阶段表达量最高。本试验成功表达了环形泰勒虫TA13815重组蛋白,该重组蛋白有较好的反应原性,且能与抗His标签蛋白的单克隆抗体和环形泰勒虫阳性血清发生特异性反应,而与健康牛血清无交叉反应。TA13815蛋白与东方泰勒虫的核昔酸和蛋白同源性均小于68%,表明该重组蛋白可作为间接ELISA诊断方法的备选抗原。