miR-26a通过PI3K/AKT通路促进脑缺血大鼠血管生成

摘要

目的 探讨miR-26a介导磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路对脑缺血大鼠血管生成的影响.方法 将100只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、miR-NC组和miR-26a组.miR-NC组和miR-26a组分别侧脑室注射5μl miR-26a模拟物阴性质控品和miR-26a模拟物,假手术组和模型组注射等量生理盐水.采用改良线栓法制作大脑中动脉闭塞模型,假手术组只插线不结扎.各组大鼠各取5只腹腔注射5-溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine,BrdU),1次/d,连续7d.将体外培养并转染的大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)分为对照组、氧葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)组、miR-NC组和miR-26a组.双荧光素酶实验验证miR-26a对第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PTEN)的调控作用.应用Longa评分检测大鼠神经功能损伤.氯化三苯四氮唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法测定脑梗死体积.分别使用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)染色法、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法和小管形成实验测定BMECs增殖、凋亡和血管生成.应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测缺血脑组织及BMECs miR-26a表达.免疫荧光双标记法[BrdU/von Willebrand因子(von Willebrand factor,vWF)]检测大鼠血管内皮细胞增殖.蛋白质印迹分析检测缺血脑组织血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)、血管生成素-2(angiopoietin-2,Ang-2)、PTEN、PI3K、AKT表达.结果 生物信息学及双荧光素酶实验验证了miR-26a对PTEN的靶向调控.与假手术组比较,模型组和miR-NC组缺血脑组织miR-26a、VEGF、bFGF、Ang-2、PI3K、AKT表达和BrdU+/vWF+细胞数量增加,而PTEN表达降低(P均＜0.05);与模型组比较,miR-26a组各项指标效果更加显著(P均＜0.05).与对照组比较,OGD组和miR-NC组BMECs增殖和血管生成能力显著增强,细胞凋亡显著减少(P均＜0.05);与OGD组比较,miR-26a组各项指标效果更加显著(P均＜0.05).结论 miR-26a能靶向抑制PTEN表达,通过激活PI3K/AKT信号通路上调血管生成相关因子(VEGF、bFGF和Ang-2),促进脑梗死大鼠血管内皮细胞增殖和血管生成.