Ri质粒介导马铃薯Y病毒外壳蛋白基因(PVY-CP)转化烟草的研究

摘要

将已克隆在大肠杆菌中的ＰＢＣＹ４０１质粒（携带马铃薯Ｙ病毒外壳蛋白基因（ＰＶＹＣＰ基因），通过三亲杂交导入具Ｒｉ质粒的发根农秆菌中，用转化子溶液感染烟草，在Ｒｉ质粒介导下，将ＰＶＹＣＰ基因导入烟草。首先用烟草的外植体与转化子菌液共培养法诱导毛状根，以毛状根为外植体在含有抗生素Ｋｍ的分化培养基上诱导愈伤组织和幼芽，继续培养获得再生植株。再生植株经冠瘿碱、ＰＣＲ、分子杂交检测，有２０％以上的植株表现为阳性，证明ＰＶＹＣＰ基因已导入烟草。对转化烟草植株后代用斑点免疫结合法和田间接病毒法检测，有３０％左右的植株表现有抗性；在烟草８６１１的６号转化株３６株自交后代中有１０株在整个生育过程中完全不发病，证明ＰＶＹＣＰ基因通过有性生殖可以遗传并在后代中表达。