去甲斑蝥素对实验性过敏性结膜炎眼部炎症及Th1/Th2平衡的影响及机制

摘要

目的:探究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)对实验性过敏性结膜炎(allergic conjunctivitis,AC)大鼠眼部炎症及Th1/Th2平衡的调节作用及其机制。方法:采用卵清蛋白(OVA)法建立SD大鼠AC模型,将大鼠随机分为对照组、模型组、NCTD低剂量组和NCTD高剂量组,除对照组外,其余各组均诱导AC模型,NCTD低、高剂量组分别按0.05mg·kg^(-1)·d^(-1)、0.1mg·kg^(-1)·d^(-1)给予NCTD灌胃,连续10d;大鼠OVA末次致敏后,观察眼部体征表现并评分,苏木精-伊红(HE)染色和高碘酸‐希夫(PAS)染色分别观察角膜与结膜组织病理学变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中细胞因子IL-2、IL-4、IL-5、IL-10及IFN-γ的含量,流式细胞术检测脾脏淋巴细胞内Th1、Th2细胞比例,实时荧光定量PCR检测结膜组织IL-4、IFN-γmRNA表达水平,免疫荧光染色检测角膜组织VEGF表达,蛋白质印迹(Western Blot)实验检测结膜组织VEGF、VEGFR2蛋白表达水平。结果:大鼠造模后出现结膜充血红肿,眼裂变小、流泪、分泌物增多等AC病理现象,炎症评分高于对照组(P<0.01),说明AC动物模型构建成功;经过NCTD低剂量组和NCTD高剂量组处理的大鼠,结膜充血红肿的现象明显缓解,流泪、分泌物均减少,炎症评分下降,角膜上皮细胞排列较为紧密,新生血管减少,结膜中杯状细胞数目有所增加,血清中IL-2、IFN-γ含量升高,IL-4、IL-5及IL-10含量降低,脾脏中Th1细胞比例和Th1/Th2比值均增加,Th2细胞比例则减少,结膜组织中IFN-γmRNA表达上调、IL-4 mRNA表达下调(P均<0.01);同时,角膜组织中VEGF阳性表达率减少,结膜组织中VEGF、VEGFR2蛋白表达均下调(P均<0.01);此外,NCTD高剂量的作用效果优于NCTD低剂量(P均<0.01)。结论:去甲斑蝥素能够缓解实验性过敏性结膜炎大鼠的病变进程,改善Th1/Th2细胞免疫失衡,其机制可能与抑制VEGF途径相关。