人Carabin基因过表达的9型重组腺相关病毒的构建及功能鉴定

摘要

目的:构建人Carabin基因过表达的9型重组腺相关病毒,并对其进行结构和功能鉴定.方法:对目的基因质粒pUC57-carabin和载体质粒pAAV9-IRES-ZsGreen进行EcoRI+XhoI双酶切,在T4DNA Ligase作用下连接酶切产物,在JM109感受态细胞中筛选pAAV9-carabin-IRES-ZsGreen质粒,将pAAV9-carabin-IRES-ZsGreen质粒应用高效HET kit转染试剂盒转染至293AAV细胞,以包装rAAV9-carabin-IRES-ZsGreen腺相关病毒,利用Q-PCR检测病毒滴度.rAAV9-carabin-IRES-Zs-Green感染人心室肌细胞株AC16,western blot检测carabin蛋白表达.结果:pAAV9-carabin-IRES-Zs-Green过表达质粒构建成功,rAAV9-carabin-IRES-ZsGreen腺相关病毒包装顺利,滴度为5.09E+12 vg/mL,感染AC16后,carabin蛋白表达显著上调.结论:rAAV9-carabin-IRES-ZsGreen腺相关病毒构建成功,并在心肌细胞中具有高效表达carabin的效应.