乔松素通过调节HIF-1α/BNIP3信号通路介导细胞自噬减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

摘要

目的:探究乔松素通过调节缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/bcl2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)信号通路介导细胞自噬减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的机制。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,建立H/R模型后以0、25、50、100、200、300μg/mL乔松素处理24h,采用MTT法检测各处理组细胞活力,筛选出合适的药物作用浓度。将体外培养的H9c2细胞随机分为对照组、模型组、乔松素低剂量组、乔松素高剂量组、HIF-1α siRNA阴性对照组、乔松素高剂量+HIF-1α siRNA组,除对照组外其余各组建立H/R模型,然后以乔松素、HIF-1α siRNA及其阴性对照分组处理后,采用MTT法、流式细胞实验分别检测各组细胞增殖及凋亡;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测量各组H9c2细胞炎性因子白细胞介素(IL)-17、IL-1β、IL-18水平;采用试剂盒测量各组H9c2细胞氧化应激因子过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平;采用单丹磺酰戊二胺(MDC)荧光染色法检测各组H9c2细胞自噬体的形成;采用免疫印迹法检测各组H9c2细胞自噬及HIF-1α/BNIP3通路相关蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组细胞活力、自噬体相对含量、细胞CAT及GSH-Px水平、细胞LC3-II/LC3-I及P62、HIF-1α、BNIP3蛋白表达降低(P0.05)。与乔松素高剂量组相比,乔松素高剂量+HIF-1α siRNA组细胞活力、自噬体相对含量、细胞CAT及GSH-Px水平、细胞LC3-II/LC3-I及P62、HIF-1α、BNIP3蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率、细胞培养基上清中IL-17、IL-1β及IL-18水平、细胞ROS及MDA水平升高(P<0.05)。结论:乔松素通过上调HIF-1α/BNIP3通路而促进自噬,进而减轻炎症与氧化应激,抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡,减轻细胞损伤。