蜈蚣提取物对人肝癌细胞HepG2及肝癌原位移植瘤STAT3信号通路的影响

摘要

目的 通过观察蜈蚣提取物(CSE)对人肝癌细胞HepG2及裸鼠肝癌原位移植瘤的影响,探讨其抗肝癌的机制.方法 HepG2细胞分为CSE250(250μg/mL)处理组、CSE500(500μg/mL)处理组、5-FU(5-氟尿嘧啶)处理组和对照组,采用酶解丙酮沉淀法分离纯化CSE并作用于人肝癌细胞HepG2,CCK8法检测细胞增殖抑制,流式细胞术检测细胞周期变化.Western blot检测CSE处理后HepG2细胞信号传导与转录激活因子3(STAT3)信号通路相关蛋白表达变化.制备人肝癌细胞裸鼠原位移植瘤模型,随机分为模型组、5-FU组、CSE10组[10mg/(kg·d)]和CSE50组[50mg/(kg·d)],每组12只,观察裸鼠原位移植瘤瘤体体积及质量变化,并检测瘤体p-STAT3、p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)蛋白表达水平.取模型组及CSE50组裸鼠肝原位移植瘤组织,采用蛋白酪氨酸激酶(PTKs)芯片技术检测并对差异蛋白进行GO及KEGG分析.结果 体外实验结果显示,CSE对人肝癌细胞HepG2增殖有明显的抑制作用(P<0.05);CSE处理HepG2细胞48 h后,细胞周期表现为S期与G2/M期细胞比例升高(P<0.05);CSE250和CSE500组p-STAT3蛋白水平均较对照组明显降低(P<0.05);动物体内抑瘤实验发现:CSE组瘤体质量及体积均低于模型组(P<0.05);CSE50组和5-FU组p-STAT3、p38MAPK蛋白水平均明显下降(P<0.05).抗体芯片筛选结果显示:CSE组呈双向调节趋势,上调的PTKs有23种;下调的PTKs有6种.GO和KEGG分析显示:CSE可通过调节MAPK级联、趋化作用、细胞侵袭、细胞黏附、血管生成等多个生物学过程,以及MAPK信号通路、磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路、Ras信号通路等发挥其抗癌作用.结论 CSE可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,并有效抑制肝癌原位移植瘤的生长,其机制可能与调控STAT3信号通路、MAPK信号通路及PI3K/AKT信号通路密切相关.