枯草芽孢杆菌-灵芝子实体发酵液改善头孢曲松钠诱导的小鼠肠道菌群失调及肠黏膜屏障功能受损

摘要

目的本实验旨在筛选出能分解利用灵芝子实体培养基的益生菌菌种,并探究用该益生菌-枯草芽孢杆菌发酵的灵芝子实体发酵液对头孢曲松钠诱导的肠黏膜屏障受损模型小鼠的影响。方法通过吸光度测量OD值、苯酚-浓硫酸测量多糖含量的方法筛选出能在灵芝子实体培养基上生长的益生菌菌种,并确定灵芝子实体培养基浓度,制备发酵液用于后续实验。采用32只健康SPF级雄性BALB/c小鼠,将小鼠随机分为4组(每组8只),分别为对照组(CON)、肠黏膜屏障受损模型组(CS)、发酵液干预组(FT)、灵芝培养基干预组(GL)。0.2 mL头孢曲松钠灌胃诱导肠道失调模型(每天两次,连续7天),从第8天开始,FT组和GL组分别灌胃益生菌-灵芝发酵液和灵芝培养基0.2 mL。第15天,处死所有小鼠,并收集血、盲肠、结肠、脾脏、粪便样本。绘制体重曲线、测量盲肠指数;结肠组织HE染色病理学检测;ELISA法检测小鼠血清中LPS、IL-10、TNF-α、IL-6水平;流式细胞仪分析脾脏CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、巨噬细胞变化情况;16S rRNA测序检测小鼠肠道菌群结构。结果枯草芽孢杆菌可以分解、利用灵芝子实体培养基,且灵芝子实体培养基的适宜浓度为33.2 mg/mL。枯草芽孢杆菌-灵芝子实体发酵液对头孢曲松钠引起的小鼠肠黏膜屏障受损有一定的缓解作用,其表现是发酵液治疗后小鼠体重恢复,结肠肿胀情况有所好转;结肠组织病理学损伤减轻,炎细胞浸润明显缓解;血清IL-10较模型组显著上升,LPS、TNF-α、IL-6较模型组显著下降;改善了头孢曲松导致的T细胞比例的过度上调和肠道菌群失调。结论实验结果提示枯草芽孢杆菌-灵芝子实体发酵液可以有效改善抗生素过量所致的肠黏膜屏障功能受损、免疫功能紊乱和肠道菌群失调,对肠黏膜屏障功能有一定调节作用。