微小RNA-21靶向抑制c-Ski在转化生长因子-β1介导人冠状动脉内皮细胞上皮间充质转化中的作用

摘要

目的探讨微小RNA(micro RNA,miR)-21靶向调控核蛋白c-Ski与转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HCAEC)上皮间充质转化的关系。方法TGF-β1诱导HCAEC,荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测上皮基因标记CD31、间充质基因标记波形蛋白(VIM)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、miR-21及c-Ski表达变化。在HCAEC中过表达c-Ski或抑制miR-21,分析TGFβ1诱导HCAEC表型变化。荧光素报告系统证实miR-21在HCAEC中对c-Ski的调控作用。结果随着TGF-β1诱导浓度增加,各基因表达呈现剂量依赖性变化。其中,20 ng/mL TGF-β1处理组细胞与未处理组(0 ng/mL)细胞比较,内皮标志物CD31表达下降为(0.150±0.031)倍;细胞间充质标记物波形蛋白表达升高为(7.51±0.78)倍、α-平滑肌肌动蛋白的表达为(15.03±0.78)倍;c-Ski表达下降为(0.20±0.040)倍,miR-21表达增加为(6.47±0.40)倍。过表达c-Ski组或miR-21抑制物组与对照组比较,CD31水平显著增高[分别为对照组的(5.80±0.60)倍和(4.73±0.28)倍],而波形蛋白[分别为(0.420±0.013)倍和(0.300±0.064)倍]、α-平滑肌肌动蛋白[分别为(0.450±0.053)倍和(0.450±0.028)倍]表达水平减低,差异具有统计学意义(P0.05)。HCAEC过表达miR-21,c-Ski转录水平较对照组显著较少,差异有统计学意义(P0.01)。结论TGF-β1诱导HCAEC发生间充质转化过程中,miR-21逐渐上调,而c-Ski表达下降,且miR-21可靶向抑制c-Ski表达。抑制miR-21或过表达c-Ski可阻止TGF-β1诱导HCAEC发生间充质转化。