多孔隙三维环境下细胞接种密度对血管平滑肌细胞增殖行为的影响

摘要

目的本研究拟在聚乙醇酸支架材料形成的多孔隙三维环境下,探究不同接种密度对人血管平滑肌细胞增殖行为的影响,并确定一个相对合适的接种密度区间,为后续构建组织工程血管选用种子细胞接种浓度进行初步探索。方法将3种不同浓度的细胞悬液接种于聚乙醇酸支架材料上,通过免疫荧光,细胞增殖实验和免疫印迹,观察细胞的形态、黏附、增殖和表型。结果细胞悬液接种后沿着支架材料生长,不同浓度的细胞悬液导致细胞形态、黏附和增殖发生变化,但是细胞收缩表型标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)及Calponin没有明显变化。当细胞悬液浓度为1×10^(7)个/mL时,接种于支架后,细胞掉落的数目最少。当细胞悬液浓度为1×10^(6)个/mL时,细胞增殖标志物增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达最多。结论生长在支架材料上的血管平滑肌细胞的形态,黏附和增殖受到细胞接种浓度的影响,综合比较细胞的形态、黏附、增殖和表型,我们认为最佳的细胞接种浓度应为1×10^(6)个/mL到1×10^(7)个/mL区间。