鸡TATA结合蛋白的亚细胞定位及基因组织表达特性分析

摘要

为探究鸡TATA结合蛋白(TATA-binding protein,TBP)的亚细胞定位以及TBP基因在鸡胚不同发育阶段不同组织中的表达情况,首先扩增鸡TBP基因的蛋白质编码区(CDS),将其亚克隆至真核表达载体pCMV-Myc构建重组真核表达载体pCMV-Myc-TBP,转染人胚胎肾细胞(HEK-293T),然后利用蛋白质印迹法和间接免疫荧光法分别检测重组蛋白的表达和亚细胞定位;进一步通过RT-qPCR方法检测TBP基因在鸡胚胎期14 d(E14 d)、出壳后1日龄(1 d)、7日龄(7 d)和14日龄(14 d)4个时间点各组织中的表达情况。结果表明,成功构建了鸡TBP基因的重组真核表达载体pCMV-Myc-TBP,转染细胞后获得与预期大小一致的Myc-TBP重组蛋白条带。亚细胞定位分析结果显示,鸡TBP蛋白主要定位在细胞核。RT-qPCR检测结果显示,鸡TBP基因在E14 d到14 d的各组织中均有表达,但均以肺脏中的表达量高,其中在1 d鸡的肺脏中表达量最高。对鸡TBP基因组织表达变化趋势分析发现,在E14 d至14 d,TBP基因在眼球、脑、心脏、肝脏、肌胃、胸肌、腿肌中的表达整体呈下降趋势,没有明显的变化规律;而肺脏中的TBP基因表达水平先升高后降低再升高,整体呈"N"型变化趋势。本研究证实鸡TBP蛋白主要定位在细胞核,TBP基因在鸡胚发育不同阶段的各组织中都有表达,但以肺脏中的表达量高。