CORM-3通过调控巨噬细胞极化促进MC3T3-E1细胞成骨分化的研究

摘要

目的:研究一氧化碳释放分子-3(carbon monoxide releasing molecule-3,CORM-3)对巨噬细胞极化的调控作用,进一步探究CORM-3介导的巨噬细胞免疫环境对MC3T3-E1细胞增殖和成骨分化的影响。方法:体外培养RAW264.7细胞,筛选可用的CORM-3浓度。RT-qPCR检测iNOS、TGF-β、IL-10等M1/M2相关基因的表达。免疫荧光染色检测各组血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白的表达。流式细胞术检测24 h后各组M1/M2巨噬细胞的比例。收集24 h后的上清液制备条件培养基,应用CCK-8、碱性磷酸酶染色和茜素红染色及RT-qPCR等检测MC3T3-E1细胞的增殖和成骨活性。结果:RT-qPCR结果显示CORM-3促进了TGF-β和IL-10的表达,降低了iNOS的表达(P<0.05),免疫荧光实验结果显示CORM-3增加RAW264.7细胞HO-1的蛋白表达,在CORM-3调控巨噬细胞的环境下,RT-qPCR结果显示CORM-3提高了OCN、Runx2及Col-1等基因的表达(P<0.05),MC3T3-E1的增殖和成骨分化增强。结论:CORM-3可通过释放CO提高HO-1的蛋白水平,促进巨噬细胞RAW264.7细胞向M2表型极化,增强MC3T3-E1细胞的成骨分化能力。