分心木乙醇提取物对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

摘要

目的探讨分心木乙醇提取物(Diaphragma juglandis fructus ethanol extract,DJFEE)通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的机制。方法以Huh7细胞为研究对象,采用不同浓度(50、100、200μg/mL)的分心木乙醇提取物处理Huh7细胞,分别为:空白对照组(Control)、分心木乙醇提取物低剂量组(L-DJFEE)、分心木乙醇提取物中剂量组(M-DJFEE)和分心木乙醇提取物高剂量组(HDJFEE)。然后采用200μg/mL的分心木乙醇提取物和10 mmol/L的Wnt/β-catenin激动剂氯化锂(LiCl)处理细胞,记为DJFEE组和DJFEE+LiCl组。噻唑蓝(MTT)、克隆形成实验检测Huh7细胞的增殖情况;Transwell小室检测Huh7细胞的迁移和侵袭能力;流式细胞术检测Huh7细胞的凋亡率;蛋白免疫印迹(Western blot)检测Huh7细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶-14(MMP-14)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B型白细胞/2型淋巴细胞样蛋白(Bcl-2)、Wnt/β-catenin通路相关蛋白的表达。结果与空白对照组相比,分心木乙醇提取物低、中、高剂量组处理Huh7细胞后,降低细胞增殖、迁移和侵袭能力,增加细胞凋亡率,下调PCNA、MMP-9、MMP-14、Bcl-2、Wnt1和β-catenin蛋白表达,上调Cleaved caspase3、Bax蛋白。DJFEE+LiCl组的迁移细胞数目、侵袭细胞数目、PCNA、MMP-9、MMP-14、Bcl-2蛋白表达明显高于DJFEE组,细胞抑制率、细胞凋亡率、Cleaved caspase3、Bax蛋白表达明显低于DJFEE组。结论分心木乙醇提取物可以抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,其作用机制可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。