从感染TMV的番茄叶纯化胞外β-N-乙酰氨基己糖苷酶

摘要

番茄系统感染ＴＭＶ（ｔｏｂａｃｃｏ ｍ ｏｓａｉｃｖｉｒｕｓ）诱导叶β－Ｎ－乙酰氨基己糖苷酶活性升高。番茄叶胞外提取液经冰冻干燥浓缩、－ ２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－２５ 离子交换层析，ＰＢＥ ９４（Ｐｏｌｙｂｕｆｆｅｒ Ｅｘｃｈａｎｇｅｒ ９４， Ｓｉｇｍ ａ）聚焦层析和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１５０ 凝胶层析纯化，获得纯化的β－Ｎ－乙酰氨基己糖苷酶。凝胶层析测得该酶的分子量为１４５ ｋＤ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得该酶的分子量为７５ ｋＤ，证明该酶由两个亚基构成。该酶能水解ｐ－硝基苯基－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基葡萄糖苷（ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧｌｃＮＡｃ）和Ｐ－硝基苯基－Ｎ－乙酰－β－Ｄ－氨基半乳糖苷（ｐＮＰ－β－Ｄ－ＧａｌＮＡｃ）两种底物，能被过碘酸氧化，Ｓｃｈｉｆｆ试剂染色。在感染ＴＭＶ 的番茄叶片中。