异亮氨酸拉链修饰的可溶性CD40L在巴斯德毕赤酵母中的表达

摘要

为了获得异亮氨酸拉链修饰的可溶性CD 40L(IZ-sCD 40L)在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达,首先用PCR和重叠PCR的方法得到了IZ-sCD 40L基因片段,然后构建了巴斯德毕赤酵母表达质粒pP ICZαA-IZ-sCD 40L,核酸测序分析表明IZ-sCD 40L的基因片段正确克隆到pP ICZαA质粒中,将其线性化后,电转化到巴斯德毕赤酵母G S115中,PCR筛选阳性重组菌株,经表型鉴定后,用甲醇进行诱导表达,经SDS-PAGE和W estern b lot印迹杂交结果证实了表达产物为重组IZ-sCD 40L的融合蛋白。