抗人脑微血管内皮细胞单域抗体P5的制备及对人和大鼠血脑屏障的影响

摘要

目的制备抗人脑微血管内皮细胞单域抗体P5,研究P5对大鼠血脑屏障结构的影响。方法采用PCR技术将已获得的P5基因片段克隆至载体pET-30a-c并测序确证,重组载体经转化诱导后通过Western blot鉴定。采用免疫荧光和免疫组织化学方法观察P5在人及大鼠脑微血管内皮细胞中的结合水平,透射电镜观察大鼠血脑屏障超微结构的变化。结果Western blot结果显示表达产物的分子量为128kD,随着单域抗体P5(1μg/ml)作用时间的延长,P5与人及大鼠的脑微血管内皮细胞结合水平增加。透射电镜结果显示随着给予单域抗体P5浓度的增大(1μg/kg,10μg/kg),脑微血管内皮细胞中吞饮小泡的数量呈现一定程度的增加。结论成功获得抗人脑微血管内皮细胞单域抗体P5,P5能增加血脑屏障的胞吞转运。