大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)苹果酸脱氢酶(mdh)基因的插入失活

摘要

本试验是用粘末端连接法把卡那霉素抗性基因(Kan^r)插入到大豆根瘤菌B.j110的苹果酸脱氢酶(mdh)基因中,使mdh基因失活。首先,通过EcoRI切点把Kan^r连接到pTZ18U载体上,经转化把这一重组DNA转入大肠杆菌XLI-Blue中,利用含有氨苄青霉素和卡那霉素的选择培养基选出转化菌株,提取pTZ18U-Kan^r质粒DNA;然后,用Sall分别切已克隆在pTZ19U中的B.j110mdh基因及pTZ18u-Kan^r,经粘末端连接把卡那霉素抗性基因连接到苹果酸脱氢酶基因中间,从而使其失活。再将所得到的这一重组DNA用电脉冲法(Electroporation)转入大豆根瘤菌B.j2143中,用以检验经插入失活后的苹果酸脱氢酶基因对大豆固氮作用的影响。