大豆总RNA提取方法比较及其在基因克隆和表达分析中的应用

摘要

为确立大豆叶、花组织提取总RNA的最佳方法,比较了植物总RNA提取试盒剂法、改良的CTAB-LiCL法和改良的热硼酸法的提取效果。通过RNA产量、纯度、凝胶电泳及后续的基因克隆和荧光定量PCR等分析,结果表明:热硼酸法所提取的叶、花总RNA含量约为其他两种方法的6倍;总RNAOD260/OD280值介于1.98～2.1;电泳条带完整清晰;应用获得的总RNA所克隆ZAT9-like基因,经测序获得885bp的核酸序列与ZAT9-like(登录号:XM_003517371.1)基因同源率达99%;荧光定量分析HistoneH3基因的扩增曲线与融解曲线峰型良好。说明该方法能够满足一般分子生物学下游实验的要求,是一种理想的针对大豆叶、花总RNA的的提取方法。