茶花品种SSR指纹图谱分型技术反应体系优化

摘要

建立茶花品种分子指纹图谱对茶花品种鉴别、品种选育和深入实施品种产权保护等具有重要意义。为筛选适用于茶花品种SSR指纹图谱构建的引物及其最优反应体系,采用梯度退火温度和正交试验设计的方法,对4对SSR引物反应条件进行了研究。结果表明,2对引物扩增出目的条带,其中引物MSCjaF25最适退火温度52.9℃,10mL体系中各组分含量为Mg2+1.2mmol/L、dNTPs0.2mmol/L、TaqDNA聚合酶0.5U、引物0.2mmol/L以及模板DNA40ng时图谱质量最优;引物MSCjaF37最适退火温度58.2℃,10mL体系中各组分含量为Mg2+0.8mmol/L、dNTPs0.1mmol/L、TaqDNA聚合酶1.0U、引物0.3mmol/L以及模板DNA40ng时,图谱质量最优。以12个茶花品种进行扩大试验证明,优化的体系重复性和稳定性良好。研究为茶花品种分子指纹图谱的构建奠定重要基础。进一步分析显示,全面开展茶花品种分子指纹图谱研究还面临着筛选更多通用SSR引物的挑战。