2种免疫层析技术用于4种传染病及其病原体检测的研究

摘要

[目的]寻求能够快速定性／定量检测4种传染病及其病原体的试验方法。[方法]应用双抗体夹心法，建立胶体金免疫层析法、上转磷光（UCP）免疫层析法检测炭疽杆菌芽孢（以下简称炭疽芽孢）、鼠疫杆菌、肠出血性大肠埃希菌O157：H7（以下简称EHEC O157），评价方法的灵敏性、特异性。通过分别检测模拟掺入3种菌／芽孢的“白色粉末”和检测3种细菌的强毒株，评价在实际环境样品检测中的应用。应用双抗原夹心法，建立胶体金免疫层析法、上转磷光（UCP）免疫层析法检测鼠疫F1抗体、SARS病毒抗体，检测239份青海鼠疫疫区人员血清、1236份新疆鼠疫疫源地鼠血清，检测18份恢复期SARS病人血清和9份健康对照者血清，以及206份出入境健康人员血清，考核2种检测抗体的方法在实际样品检测中的应用。通过比较炭疽杆菌、鼠疫杆菌、大肠埃希菌O157以及鼠疫杆菌抗体、SARS病毒抗体的胶体金免疫层析方法、UCP免疫层析方法，比较我们建立的2套系统与加拿大RAMP系统检测炭疽杆菌的能力。[结果]UCP免疫层析方法能在35min内完成检测，炭疽芽孢检测掺入“白色粉末”的样品灵敏性为1×10^4cfu／test，炭疽芽孢最低检测限为1×10^5cfu／ml（原溶液芽孢浓度），多种不同的芽孢菌及其它细菌共38种54株检测说明该法特异性良好，仅与腊样芽孢杆菌有交叉反应，特异性为97％；鼠疫杆菌检测灵敏性为5×10^4cfu／ml，最低检测菌数为5×10^3cfu／test，在10^7cfu／ml水平上未发现与30余种细菌有交叉反应，包括最近缘假结核耶尔森菌；EHEC O157检测灵敏性为1×10^3cfu／ml，仅与弗氏枸橼酸杆菌有交叉反应，特异性为98％。胶体金免疫层析方法能在10min内完成检测，炭疽芽孢、鼠疫杆菌、EHEC O157检测灵敏度分别为1×10^6cfu／ml、1×10^5cfu／ml、1×10^5cfu／ml，“白色粉末”等环境样品最低可检测敏感性为1×10^5cfu，1×10^4cfu，1×10^4cfu／test。胶体金免疫层析方法分别应用于炭疽、鼠疫强毒株的检测，检测限为5×10^4cfu／test和7×10^4cfu／test。在实际血清样品检测中，与间接血凝方法对比，鼠疫抗体UCP和胶体金免疫层析方法有更好的敏感性。血清样品检测显示，SARS抗体的胶体金和UCP免疫层析方法均有较好的特异性和敏感性。[结论]2种免疫层析方法都有快速、敏感、特异的特点：上转磷光免疫层析方法可实现定量检测，敏感性优于胶体金免疫层析法；炭疽检测与加拿大RAMP检测系统相当；胶体金免疫层析法具有简便、直观、易行的特点。2种免疫层析方法均适合于炭疽芽孢芽孢、鼠疫杆菌、EHEC O157、鼠疫杆菌抗体、SARS抗体的现场检测和筛查。