枳两个GRAS基因cDNA全长的克隆及其亚细胞定位分析

摘要

利用生物信息学方法以拟南芥SCL6和杨树GRAScDNA序列作为模板,对柑橘EST数据库进行同源检索筛选出柑橘SCL6和GRAS基因的cDNA序列,并以枳[Poncirus trifoliata(L.)Raf.]花cDNA为模板,根据以上cDNA序列设计5'末端和3'末端扩增的特异引物,利用5'RACE和3'RACE技术,分别获得该基因的5'和3'末端,序列拼接后获得枳的SCL6和GRAScDNA全长。分别命名Pt-SCL6和Pt-GRAS,大小分别是2668bp和1911bp,在GenBank的登录号分别是GQ505957和GU072592,其分别编码706个和636个氨基酸全长。生物信息学分析表明Pt-SCL6和Pt-GRAS的cDNA序列中分别有microRNA171(miR171)和miR1446的识别位点,其与其它植物的GRAS一样有着高度保守的序列即GRAS结构域。构建Pt-SCL6和Pt-GRAS亚细胞定位载体35S-GW-GFP-GQ505957/GU072592,基因枪转化洋葱表皮细胞,暗培养24h后激光共聚焦显微镜下观察。亚细胞定位结果表明Pt-SCL6和Pt-GRAS均定位于细胞膜中。转录因子Pt-SCL6和Pt-GRAS表现出在细胞膜区域定位的现象。