检测血吸虫循环抗原酶免疫试剂标准化平台技术建设及应用

摘要

目的研制标准化的血吸虫循环抗原(SCAg)酶免疫法检测试剂,建立规模化生产能力。方法通过体外培养及分子筛液相色谱获取虫源性及虫卵源性SCAg,用免疫增强剂和淋巴结内免疫法制备高效、特异抗SCAg的捕捉抗体,应用半抗原抗体桥放大技术制备高灵敏度SCAg识别探针,通过抗氧化剂及螯合剂比较研究制备稳定的底物系统,按医学决定水平确定免疫学质量控制标准及参考,优选原材料质量,规范生产工艺,研究制定反应体系的标准化,建立SCAg快速研发的技术平台。结果TCA提取的SCAg测出最低含量为1ng/ml(10-9g),对实验高感染(1000±10条尾蚴)家兔混合血清检测的终点滴度可达1∶1280以上,有效诊断率为96.29%,研制的SCAg试剂的批内变异4.69%～7.66%,批间变异4.12%～7.19%,一年内同批试剂分次对定值血清测定OD值变化小于10%,显示一年内为有效期。通过SCAg技术平台,进一步研究开发了囊尾蚴CAg、弓形体CAg的检测方法,初步实验观察对囊尾蚴囊液及感染弓形体5d的小鼠腹水抗原检测滴度分别达到1∶640及1∶1280。结论SCAg标准化平台技术可大量地、快速地提供标准化的血吸虫病诊断试剂,对其他寄生虫CAg检测显示有较好的应用前景。