真核表达重组小鼠IL-15/Fc融合蛋白的制备和活性鉴定

摘要

目的制备真核表达小鼠白细胞介素15(IL-15)和IgGγ1Fc段融合蛋白,并探讨其对抗原特异性CD8+T细胞的作用。方法运用RT-PCR方法,从B6小鼠脾细胞中分离小鼠IL-15和IgGγ1绞链区-CH2-CH3Fc cDNA。在IL-153′端和Fc5′端引入BamHI酶切位点,将IL-15和Fc直接连接,构建小鼠IL-15/Fc融合蛋白基因,再连接到真核表达质粒载体pcDNA3.1(a+)上,转化CHO-S细胞表达、纯化后,研究其活性。结果融合蛋白486bp的编码由162个氨基酸组成,其中含48个信号肽氨基酸的小鼠IL-15前体蛋白和由681bp编码227个氨基酸的IgGγ1-CH2-CH3功能区构成;表达蛋白在IL-15信号肽引导下能高效分泌到培养液中,有二聚体和三聚体两种天然结构,单体分子量约50kDa,能特异性的结合IL-15R并抑制抗原诱导的CD8+T细胞的增殖反应。结论成功构建了小鼠IL-15/Fc融合蛋白真核表达载体,并在CHO-S细胞中得到高效表达。此融合蛋白具有较高的生物学活性,可有效地抑制抗原特异性CD8+T细胞的增殖反应。