抗丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

目的制备抗人丙酮酸脱氢酶复合体E2亚基(pyruvate dehydrogenase complex E2,PDC-E2)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA法、Western blot及免疫组化的方法对mAb进行特性鉴定,通过免疫沉淀联合质谱、Uni-ZAP XR肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原。结果获得1株可稳定分泌抗人PDC-E2mAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),该mAb可用于ELISA检测、Western blot、免疫组化和免疫沉淀实验。结论成功制备了抗人PDC-E2的mAb,为PDC-E2的研究提供了有力的工具。