黑麦1R染色体的显微分离、体外扩增及扩增产物的鉴定

摘要

借助Leitz显微操作器 ,在国产倒置显微镜下 ( 40 0× )用玻璃针对处于有丝分裂中期的黑麦根尖细胞中的 1R染色体成功地进行了分离。分离出来的 1R染色体转入 0 .5ml的Eppendorf管中 ,用蛋白酶K处理 ,把DNA释放出来 ;经Sau3A酶切 ,再与人工合成的Sau3A连接头连接 ;以连接头的一条链的核苷酸顺序片段为引物对DNA酶切片段进行了PCR扩增。琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物的长度大约为 30 0～ 1 0 0 0bp。以生物素分别标记的黑麦总体DNA和小麦rDNA为探针进行斑点杂交 ,结果表明PCR扩增产物确实来源于黑麦的 1R染色体DNA。这个方法为构建黑麦 1R染色体亚基因组文库和筛选 1R染色体特异性探针奠定了基础。