活化大鼠肝星状细胞新表达甘丙肽2型受体拮抗甘丙肽增殖抑制作用

摘要

目的:探讨甘丙肽受体在肝星状细胞(hepaticstellate cell,HSC)中表达和对细胞增殖的影响.方法:使用胶原酶原位灌注法分离大鼠原代HSC体外培养,半定量RT-PCR法检测静止期(0 wk)和培养活化(1 wk)HSC中甘丙肽及其3种受体(GalR1、GalR2和GalR3)表达变化.大鼠HSC-T6细胞株体外培养,免疫荧光法检测GalR2蛋白在HSC-T6细胞中表达;给或不给GalR2中和抗体(5μg/mL),MTT法观察不同浓度甘丙肽(0-10000 nmol/L)干预后甘丙肽对HSC增殖和活力的影响.结果:成功分离大鼠原代HSC和体外培养.静止期及活化的HSC均可检测到甘丙肽及GalR3 mRNA表达,但无GalR1 mRNA表达,而GalR2 mRNA在活化HSC中表达.细胞免疫荧光法进一步证实GalR2蛋白在HSC-T6中表达.甘丙肽处理时,HSC-T6增殖水平在1、10、100和1000 nmol/L甘丙肽时分别下降至对照组的86.7%(t=3.976,P=0.028)、83.1%(t=4.45,P=0.012)、78.1%(t=5.75,P=0.006)和73.1%(t=5.38,P=0.008);给予GalR2中和抗体联合干预时,HSC-T6增殖抑制在甘丙肽1和10 nmol/L时即降至相应对照组67.9%(t=5.11,P=0.015)和73.1%(t=6.56,P=0.003),与相应浓度甘丙肽组相比,分别下降21.7%(t=3.35,P=0.028)和12.6%(t=2.78,P=0.049).结论:HSC活化时新表达GalR2拮抗GalR1介导的甘丙肽对HSC增殖抑制作用.