Hoechst33342与DAPI标记细胞核对细胞内活性氧检测的影响比较

摘要

目的探讨Hoechst33342与DAPI两种荧光染料标记细胞核后对细胞内活性氧水平的影响。方法静息培养的血管平滑肌细胞加入晚期糖基化终末产物作用10min，加入标记活性氧的荧光探针H2DCFDA，再分别加入Hoechst33342和DAPI两种荧光染料进行核标记。荧光显微镜下观察细胞核被标记的数目与其细胞内活性氧的荧光水平，比较两种染料标记细胞核后细胞内活性氧的荧光强度。结果Hoechst33342染料标记5min后即可见细胞核被标记上，并且随着时间延长被标记的核数目并不发生改变；而与之明显不同的是，DAPI染料标记5min时，只有几个细胞核被标记上，但随着时间的延长，被标记的核数目越来越多。Hoechst33342标记后细胞内活性氧的荧光强度并不随时间延长发生变化，而DAPI标记随时间延长，被标记的细胞核数目越多，显示活性氧绿色荧光的细胞数就越少，DAPI标记的细胞核数与显示活性氧绿色荧光的细胞数呈反比。这些结果提示，DAPI染料在标记细胞核时破坏了活性氧在细胞内的储存，干扰了实验结果。结论检测细胞内活性氧时，应使用Hoechst33342核标记染料而不能用DAPI核标记染料。[作者简介]周玉环，硕士研究生，研究方向为血管重构的分子机制与防治。