应用长臂光敏生物素核酸探针检测医学真菌的研究

摘要

〔目的〕建立PCR结合长臂光敏生物素核酸探针杂交检测医学真菌的方法。〔方法〕首先合成医学真菌通用引物 ,用PCR扩增白色念珠菌 18SrRNA基因 ,用长臂光敏生物素标记纯化的扩增产物作为核酸探针 ,然后用此探针对PCR后的基因扩增产物进行Southern杂交检测医学真菌。通过用白色念珠菌感染人鼠 ,建立念珠菌病的实验动物模型 ,验证血培养法、PCR法和PCR扩增及Southern杂交检测医学重要真菌的敏感性。〔结果〕通用引物可以扩增白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等 9种医学常见真菌的 18SrRNA基因 ,扩增片段长度为 62 1～ 687bp。此引物只扩增真菌DNA ,不扩增临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA。利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增及长臂光敏生物素核酸探针Southern杂交法检测真菌血症的灵敏度 ,实验证明后者的敏感性最高。〔结论〕本方法快速、敏感、不需放射性同位素 ,有较好的临床应用前景。