携带IRES的BMP_2绿色荧光蛋白表达载体的构建和表达

摘要

目的 :构建携带有BMP2 基因的pIRES2 绿色荧光蛋白表达载体 ,为BMP2 在体内外表达及蛋白定位提供标记。方法 :酶切 pCDAN3.1-BMP2 质粒 ,获得BMP2 cDNA片段并亚克隆至 pUC18载体上 ,随后用SalⅠ单酶切pUC18-BMP2 ,再次获得BMP2 cDNA ,同时用SalⅠ将载体 pIRES2 -EGFP线性化后去磷酸化修饰。连接二者构建重组质粒。酶切筛选阳性克隆并鉴定插入的方向。重组质粒转染细胞 ,用激光共聚焦显微镜、RT -PCR及流式细胞仪检测基因在细胞内的定位、表达及转染效率 ;结果 :重组载体经酶切和测序证明构建正确 ,并在细胞中表达。结论 :成功构建了 pIRES2 -BMP2 -EGFP表达载体 ,为研究BMP2