超声介导白蛋白微泡破裂法促进增强型绿色荧光蛋白C3基因在中国仓鼠卵巢细胞的表达

摘要

基因治疗的研究已取得不少进展 ,但要成功地应用于临床仍存在许多困难 ,安全、有效的基因载体及良好的靶向性就是其中最重要的难点之一。本研究根据超声介导白蛋白微泡破裂可以增加真核细胞膜对大分子 (如DNA)通透性的原理 ,探讨一种新的转基因方法 ,以便安全有效和定向地转移目的基因。实验中选择绿色荧光蛋白C3基因为标记基因 ,以白蛋白微泡为载体 ,用超声介导微泡破裂的方法在体外进行中国仓鼠卵巢细胞的基因转化 ,同时以脂质体为对照 ,激光共聚焦显微镜和流式细胞计数仪分别定性和定量观察细胞转化效率。台盼蓝染色观察细胞的活性。体外试验发现 0 .8MHz、1.0W cm2 、10 %脉冲周期、60s超声介导 10 %白蛋白微泡破裂可以有效稳定转化增强的绿色荧光蛋白C3基因在中国仓鼠卵巢细胞表达 ,平均转化阳性率可达 5 6.2 % ,活性实验证明对细胞无毒副作用 。