香菇SSR-PCR技术体系的优化及其在遗传多样性分析中的初步应用

摘要

为建立稳定的香菇SSR技术体系,采用L16(45)正交试验设计,对影响香菇SSR-PCR的主要因素进行了优化筛选,建立了最佳的反应体系。在20μl反应体系中,包含1.5mmol/LMg2+,75ng模板DNA,0.25mmol/L dNTPs,0.50μmol/L引物及1.5UTaq酶。梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度为62℃。以该体系为基础,应用5对引物扩增8个香菇菌株的基因组DNA,扩增条带清晰稳定,聚类分析结果能较好地反映供试菌株的地理来源关系。以0.5的相似性为分割点,8个菌株可分成2大类群。类群Ⅰ主要由北方菌株组成,类群Ⅱ由南方菌株组成。该研究为SSR标记技术在香菇分子生物学研究方面的应用奠定了基础。