槲寄生素对人骨肉瘤U20S细胞的抑制及对PI3K/Akt/mTOR通路的调控作用

摘要

目的:探讨槲寄生素对人骨肉瘤U20S细胞的抑制作用,并探讨其对磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/Akt/m TOR通路的调控作用。方法:对数期生长U20S细胞分为5组:空白组,阳性组,槲寄生素低剂量组、中剂量组、高剂量组,空白组、槲寄生素各剂量组分别用0、5、10、20 mg·L^-1槲寄生素溶液处理,阳性组用245 mg·L^-15-FU处理,干预24 h后比较各组细胞形态学变化;采用MTT法检测并对比干预24、48、72 h后细胞增殖情况;分别采用Transwell法、流式细胞术检测并对比干预48 h时穿膜细胞数、凋亡率;分别采用RT-qPCR、Western blot法检测并对比干预48 h时细胞中PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白及磷酸化Akt(pAkt)蛋白表达情况。结果:空白组细胞生长状态良好,不同干预组细胞数量减少、轮廓及遮光性变差,部分细胞变圆,呈漂浮状态,其中槲寄生素高剂量干预组生长状态最差。不同时刻各干预组MTT实验OD值从大至小、穿膜细胞数从多至少依次为:空白组>槲寄生素低剂量组>阳性组>槲寄生素中剂量组>槲寄生素高剂量组,除阳性组与槲寄生素中剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05),其他各组两两比较,差异均有统计学意义(P0.05),其他各组OD值均随时间的延长呈升高趋势(P0.05),其他各组两两比较,差异均有统计学意义(P槲寄生素低剂量组>阳性组>槲寄生素中剂量组>槲寄生素高剂量组,除阳性组与槲寄生素中剂量组比较,差异无统计学意义(P>0.05),其他各组两两比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:槲寄生素可有效抑制人骨肉瘤U20S细胞增殖和侵袭,促进凋亡,其中20 mg·L^-1的槲寄生素干预效果最佳,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR通路发挥调控作用有关。