香加皮杠柳苷对MCF-7细胞周期及p21^(WAF1/CIP1)表达的影响

摘要

目的研究香加皮杠柳苷(CPP)对人乳腺癌MCF-7细胞周期及p21WAF1/CIP1表达的影响,探讨其抗肿瘤作用及作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度CPP(1.25、2.50、5.00、10.00、20.00ng/ml)作用不同时间(24、48、72h)对MCF-7细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞术分析不同浓度CPP(2.50、5.00、10.00ng/ml)分别作用于MCF-7细胞6、12、24、48、72h对肿瘤细胞周期的影响;并采用RT-PCR和免疫细胞化学技术检测细胞周期相关因子p21WAF1/CIP1的表达。结果 CPP能明显抑制MCF-7细胞的增殖,并呈浓度及时间依赖性,作用于MCF-7细胞48h的IC50为(4.88±0.16)ng/ml。流式细胞术结果显示,CPP作用MCF-7细胞24h时,G0/G1期细胞明显增多,而S期和G2/M期细胞显著减少,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),其中5.00ng/ml组G0/G1期细胞由对照组的(49.33±3.25)%升高至(79.47±2.40)%,S期和G2/M期细胞由对照组的(28.47±1.59)%和(22.20±2.09)%分别下降至(10.13±3.26)%和(10.40±1.41)%。经CPP处理的MCF-7细胞中p21WAF1/CIP1mRNA的表达明显增强,p21WAF1/CIP1/β-actin光吸度比值与对照组相比明显增高(P<0.05)。免疫细胞化学结果显示,CPP组MCF-7细胞中p21WAF1/CIP1蛋白的表达随作用浓度的增加而增强,其中10.00ng/ml组肿瘤细胞p21WAF1/CIP1的表达呈强阳性。结论香加皮杠柳苷(CPP)具有显著的体外抗肿瘤作用,且有效剂量很小,其IC50仅为(4.88±0.16)ng/ml。CPP可使MCF-7细胞发生G0/G1期阻滞,并可使细胞周期相关基因p21WAF1/CIP1的mR-NA及蛋白表达增强,提示阻滞细胞周期可能是CPP体外抗肿瘤的作用机制之一。