整体原位杂交检测ERα基因在小鼠胚胎发育中的表达

摘要

为制备地高辛标记的小鼠雌激素受体α(ERα)RNA探针,用其研究ERα在小鼠胚胎发育过程中的表达。通过RT-PCR,获得ERα基因片段,构建ERα/pGEM-3Z重组质粒,分别用HindⅢ和EcoRⅠ进行酶切得到线性化DNA片段,以T7和Sp6聚合酶合成地高辛标记的正反义RNA探针,然后通过胚胎整体原位杂交技术分析ERα在小鼠胚胎中的表达。结果构建了ERα/pGEM-3Z质粒,获得高效价的正反义dig-ERαRNA探针。运用该探针检测到ERα在10.5dpc胚胎的前脑、脊神经管、生殖嵴、肢芽及颌弓中表达,在13.5dpc胚胎的端脑、中脑、脊髓、肢芽及生殖系统中表达,为进一步研究ERα在小鼠胚胎发育中的功能打下了基础。