小鼠CTLA4-Ig融合蛋白的表达、纯化及活性测定

摘要

目的:在真核细胞中表达CTLA4鄄Ig融合蛋白,获得纯品并测定其生物学活性。方法:用电转染的方法将真核表达载体pREP7鄄CTLA4鄄IgG2c转染SP2/0细胞,经300μg/ml的潮霉素筛选得到阳性克隆;大量培养后收集含有重组CTLA4鄄IgG2c的细胞培养上清,用rProteinA亲和层析柱纯化CTLA4鄄Ig。用还原和非还原性SDS鄄PAGE和蛋白印迹进行鉴定。采用单向混合淋巴细胞培养(3H掺入法)测定CT鄄LA4鄄Ig对T细胞增殖的抑制效应。结果:阳性克隆大量培养的细胞上清经rPrtoteinA亲和层析后得到纯化CTLA4鄄Ig。还原条件下SDS鄄PAGE和Westernblot的结果显示在55KD出现目的蛋白条带;在非还原条件下SDS鄄PAGE和Westernblot在130KD处出现目的蛋白条带。混合淋巴细胞培养5d的结果显示,CTLA4鄄Ig浓度为10μg/ml时可以抑制T细胞的增殖;20μg/ml时抑制达到最大程度(P<0.05);继续增加CTLA4鄄Ig的浓度,其抑制作用不再增强。3、7d时的抑制作用不明显。结论:在SP2/0中表达了小鼠CTLA4鄄Ig融合蛋白,该融合蛋白能抑制T细胞的增殖。