小鼠单个植入前胚胎cDNA文库的构建及应用

摘要

哺乳动物合子基因组激活和植入前胚胎阶段特异性表达基因的研究一直是发育生物学研究的重点。发现和克隆植入前胚胎阶段特异性表达的基因需要有效的方法 ,阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种较好的方法。用小鼠单个成熟卵细胞、受精卵、2 细胞、4 细胞和 8 细胞胚胎分别构建了cDNA文库。滴度分别为 :6 2× 1 0 5、8 3× 1 0 5、1 0 4× 1 0 6、1 5 1× 1 0 6和 1 62×1 0 6。随机挑选了 2 9个克隆并进行了序列分析 ,结果表明 ,和已知表达序列标签 (ESTs)同源的序列为 65 5 2 % ( 1 9 2 9) ,未知序列为 1 3 79% ( 4 2 9) ,并发现了 2个重复序列。用特异性引物 ,分别对小鼠持家基因 ( β actin)和发育特异基因 (OCT 4)进行PCR扩增 ,结果表明 ,所建立的cDNA文库可以反映小鼠胚胎在不同发育阶段整个基因群体的转录活性 。