釉原蛋白基因启动子的克隆及在不同细胞中转录调控的分析

摘要

目的:克隆釉原蛋白基因启动子及可能影响转录调控的序列,分析其在不同细胞中的转录模式。方法:检索并分析釉原蛋白基因的上游调控序列。利用PCR及酶切方法,从小鼠C57BL/6J基因组上扩增不同长度(包括基本启动子区域)的转录调控序列,与PGL3-Basic载体的虫荧光素酶基因连接。瞬时转染CHO、Hela、UMR-106细胞,检测荧光素酶的活性,分析不同长度的启动子片段在各种细胞中的转录活性。结果:共构建了6个不同长度的报告载体,瞬转后发现在Hela细胞中有较强的荧光素酶活性,在CHO、UMR-106细胞中活性很弱。在不同的细胞内,启动子活性随片段长度变化,其变化趋势有明显的相似性。表现为在转录起始点上游975bp与532bp的区域具有较强的转录活性,而转录起始点上游285bp区域的转录活性有所降低。结论:釉原蛋白的启动子可在Hela细胞中激活,Hela细胞可作为研究釉原蛋白启动子转录调控的细胞模型;初步判断釉原蛋白启动子上的-1693与-975之间的序列为转录抑制区域,-532与-285之间为转录增强区域。