食管鳞癌相关成纤维细胞的原代培养及其促癌作用研究

摘要

目的原代培养食管鳞癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)及癌旁相关成纤维细胞(peri-tumor fibroblast,PTF),并对其生物学特性及促癌作用进行初步探讨。方法对比使用组织块贴壁法和组织解离法,原代培养并分离纯化CAFs与PTFs,采用CCK-8绘制其生长曲线,免疫荧光法对其表面标志物进行鉴定;建立原代成纤维细胞与食管鳞癌细胞系KYSE150体外共培养模型,采用Transwell和划痕实验评估成纤维细胞对食管癌细胞侵袭、迁移的影响。结果组织解离法较组织块贴壁法培养成功率更高,细胞生长更快,而组织块贴壁法纯度优于组织解离法;CAFs与PTFs均为波形蛋白(Vimentin)阳性、细胞角蛋白(CK19)阴性细胞;与PTFs相比,CAFs增殖活性明显较高,α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)高表达;在共培养模型中,CAFs对于食管鳞癌细胞系KYSE150的侵袭、迁移行为具有显著促进作用(P<0.05),而PTFs的促进作用不明显。结论通过组织块贴壁法和组织解离法成功分离培养CAFs和PTFs,CAFs特异表达α-SMA,能够显著促进食管鳞癌细胞系KYSE150的恶性生物学行为。