BDM支架“人工羊膜”的制备及立体培养的初步实验研究

摘要

目的利用羊膜间充质干细胞与生物基质体外制备“人工羊膜”,并对其活性进行验证,以期为优化人工羊膜材料和后续实验积累经验。方法分离、培养人羊膜间充质干细胞,经鉴定后,用混合法按体积1∶1比例将干细胞悬液与BD-基质胶(BD-matrigel,BDM)结合,制成底面积为2 cm 2,厚约3~5 mm,浓度为3×10^5/mL的圆形薄膜,即“人工羊膜”,将其置于三维培养体系中培养(实验组);同期将3×10^5/mL浓度,不含BD基质胶的羊膜间充质干细胞置于相同培养体系中(对照组)。分别在1、4、7 d时,用普通光学显微镜观察两种不同培养方式下的细胞变化,同时运用流式细胞仪检测二者凋亡情况,应用ELISA检测其分泌血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的量。结果细胞形态学观察发现,对照组间充质干细胞在原代培养后48 h左右开始完全贴壁生长,7 d时融合度可达90%以上,传至第三代呈均一长梭形的间充质干细胞;实验组间充质干细胞则表现为聚集成球生长;两组细胞生长良好,漂浮细胞少见。经Annexin-V染色后,用流式细胞仪检测结果显示:实验组与对照组细胞凋亡率分别为2.91%、4.91%,差异有统计学意义(P0.05)。结论羊膜间充质干细胞在以BD基质胶支架的“人工羊膜”中可以存活,并具有良好的增殖、分泌能力。