氢氧化铝佐剂与甲型肝炎病毒抗原吸附条件的优化及吸附产物免疫原性评价

摘要

目的优化氢氧化铝Al(OH)_3佐剂与甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)抗原的吸附条件,并评价吸附产物的免疫原性。方法选取缓冲盐终摩尔浓度(0.01、0.02和0.04 mol/L)、pH(5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0)、氯化钠(NaCl)终摩尔浓度(0.075、0.13、0.15、0.17、0.45、0.75、1.0 mol/L)、混合方式(稀释后混合、不稀释直接混合)及滴加顺序[HAV原液滴加至Al(OH)_3溶液、Al(OH)_3溶液滴加至HAV原液]进行单因素筛选。以Al(OH)_3吸附率为评价指标,通过正交试验对筛选出的因素进行优化。采用最优及次优组合条件制备的吸附产物经腹腔免疫NIH小鼠(雌雄各半),0.5 mL/只,每组10只,于免疫后28 d,经眼球或心脏采血,分离血清,HAV抗体定性检测试剂盒(ELISA法)检测HAV抗体水平,小鼠血清抗体阳转率评价吸附产物的免疫原性。结果单因素筛选结果表明,缓冲盐终摩尔浓度、pH、NaCl终摩尔浓度对吸附效果可产生明显影响(F分别为6.582、14.007、8.612,P均0.05),确定缓冲盐终摩尔浓度为0.01及0.02 mol/L,pH为5.5~7.0、NaCl终摩尔浓度为0.13~0.17 mol/L。正交试验确定影响吸附效果因素依次为:缓冲盐终摩尔浓度>pH>NaCl终摩尔浓度,最优组合为:pH 6.3+缓冲盐终摩尔浓度0.01 mol/L+NaCl终摩尔浓度0.15 mol/L,次优组合为:pH 5.8+缓冲盐终摩尔浓度0.02 mol/L+NaCl终摩尔浓度0.17 mol/L。最优及次优组合制备吸附产物免疫小鼠的血清抗体阳转率均为100%。结论优化条件制备的吸附产物具有良好的免疫原性,本研究为甲肝灭活疫苗研究奠定了基础。