经典名方固阴煎基准样品HPLC指纹图谱研究

摘要

目的 建立经典名方固阴煎基准样品HPLC指纹图谱,结合多元统计分析对15批固阴煎基准样品进行质量评价,为其基准样品质量控制研究提供参考。方法 采用Waters SymmetryR C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱(0~10 min,0~5%乙腈;10~20 min,5%~10%乙腈;20~33 min,10%~11%乙腈;33~42 min,11%~18%乙腈;42~50 min,18%乙腈;50~80 min,18%~40%乙腈;80~100 min,40%~100%乙腈),体积流量1 mL/min,柱温40℃,检测波长230 nm,进样体积5μL,建立固阴煎基准样品HPLC指纹图谱,并进行方法学考察。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012版)对15批固阴煎基准样品指纹图谱进行相似度评价,匹配共有峰,并对各共有峰进行归属研究。结合聚类分析、主成分分析(principal component analysis,PCA)与正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)对共有峰结果进行统计学分析,评价不同批次固阴煎基准样品的质量差异,并找寻造成批间质量差异的主要成分及药味来源。结果 固阴煎基准样品HPLC指纹图谱方法学验证良好,15批固阴煎基准样品与对照指纹图谱的相似度均大于0.9。共标定了24个共有峰,经与混合对照品比对,鉴定11个色谱峰,分别为1号峰没食子酸、3号峰5-羟甲基糠醛、6号峰莫诺苷、7号峰绿原酸、9号峰马钱苷、11号峰甘草苷、12号峰金丝桃苷、13号峰毛蕊花糖苷、14号峰3,6′-二芥子酰基蔗糖、22号峰甘草酸、23号峰五味子醇甲。聚类分析和PCA可将15批基准样品分为2类,分析结果可互相印证。OPLS-DA(VIP>1)找到莫诺苷、5-羟甲基糠醛、绿原酸在内的11个差异性色谱峰,分别归属于单味药制远志、炒菟丝子、山茱萸、炙甘草和熟地黄。结论 建立的固阴煎基准样品HPLC指纹图谱专属性强、灵敏度高、分离度好、重复性、稳定性良好,除人参和炒山药以外均有表征,可为其后续制剂开发和质量控制研究提供参考。