木薯普通花叶病毒侵染性克隆及GFP表达载体的构建与分析

摘要

木薯普通花叶病毒（Cassava common mosaic virus, CsCMV）（Potexvirus属, Alphaflexiviridae科）是新发现的一种潜在威胁木薯产业的病毒。本研究以前期在中国首次报道发现的CsCMV海南儋州Hainan-DZ分离物（CsCMV-HN）为基础，利用In-Fusion无缝克隆将CsCMV-HN全长cDNA片段克隆到植物表达载体p GreenII-35S上，构建其全长c DNA侵染性克隆pCsCMV-HN。通过农杆菌介导法将侵染性克隆pCsCMV-HN注射接种本生烟，接种10 d后开始出现褪绿及叶皱缩等症状，经RT-PCR检测和病症观察统计，侵染效率达100%。在此基础上，采用90 bp重复的CP亚基因组启动子（subgenomic RNA promoter, SGP）策略构建其携带gfp报告基因的病毒表达载体pCsCMV-GFP，农杆菌注射接种本生烟7～10 d后，在紫外灯下可观察到非接种叶有较强的绿色荧光，RT-PCR检测和Western blot分析表明pCsCMV-GFP可在本生烟上系统性表达GFP。本研究成功构建的CsCMV侵染性克隆及GFP表达载体将为进一步研究该病毒基因功能及致病机制提供借鉴。