通俗环毛蚓、参环毛蚓、赤子爱胜蚓的分子鉴定及纤溶、抗凝活性对比

摘要

目的 鉴定参环毛蚓、通俗环毛蚓以及药典外研究较多的赤子爱胜蚓，再比较3种鲜体蚯蚓在两种不同提取方法下的纤溶和抗凝活性，并检测乙醇沉淀物的分子量。方法 采用DNA分子鉴定法鉴别3种蚯蚓。采用水提法提取鲜体蚯蚓蛋白，进一步采用乙醇沉淀法对水提物中的蛋白进行富集，利用纤维蛋白平板法和纤维蛋白原-凝血酶时间法（Fibg-TT法）测定纤溶活性和抗凝活性，利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测3种蚯蚓乙醇沉淀物的分子量。结果 以线粒体细胞色素c氧化酶亚基I（COI）基因片段为识别片段准确鉴定出了3种蚯蚓。比较3种蚯蚓水提液的抗血栓活性：参环毛蚓水提液的抗凝活性和纤溶活性最强，而赤子爱胜蚓水提液活性最弱；比较3种蚯蚓乙醇沉淀物的抗血栓活性：参环毛蚓乙醇沉淀物的纤溶活性最强，而通俗环毛蚓乙醇沉淀物的抗凝活性最强；赤子爱胜蚓的乙醇沉淀物纤溶和抗凝活性均最弱。参环毛蚓和通俗环毛蚓乙醇沉淀物的蛋白分子量主要分布在25～70 kDa，赤子爱胜蚓乙醇沉淀物的蛋白分子量主要分布在25～40 kDa。结论 药典地龙品种通俗环毛蚓和参环毛蚓的纤溶、抗凝活性远大于药典外的常用品种赤子爱胜蚓，3种蚯蚓中抗血栓活性蛋白有明显差异；乙醇沉淀法可有效富集抗血栓蛋白。