大蒜素对5-氟尿嘧啶治疗肝癌的增效作用及机制

摘要

目的研究大蒜素增强肝癌细胞SMMC-7721对5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性作用及机制。方法用不同浓度的大蒜素和亚叶酸钙(CF)同时联合5-FU处理肝癌细胞株SMMC-7721。将对数生长的SMMC-7721细胞株随机分为空白对照组、5-FU(100 mg/L)组、低浓度大蒜素(25 mg/L)+5-FU(100 mg/L)组、中浓度大蒜素(50 mg/L)+5-FU(100 mg/L)组、高浓度大蒜素(100 mg/L)+5-FU (100 mg/L)组、低浓度CF(5 mg/L)+5-FU(100 mg/L)组、中浓度CF(10 mg/L)+5-FU(100 mg/L)组、高浓度CF(20 mg/L)+5-FU(100 mg/L)组。采用CCK-8检测细胞增殖抑制率,选择同类药物中抑制率最高的组完成后续实验。采用流式细胞术检测细胞周期。用Hoechst 33258染色观察细胞凋亡。采用Western Blot法检测与耐药相关的P糖蛋白(Pgp)和多药耐药相关蛋白-1(MRP-1)表达。结果与5-FU组比较,低、中、高浓度大蒜素均可协同5-FU抑制SMMC-7721生长,而高浓度大蒜素+5-FU组的增殖抑制作用最明显(P<0.05);选择效果较好的高浓度大蒜素+5-FU组和中浓度CF+5-FU组继续完成后续实验。各给药组均能将细胞阻断在S期,高浓度大蒜素+5-FU组的S期阻滞作用较其他组更为明显,并且还具有明显的G2/M期细胞阻滞作用(P<0.05)。高浓度大蒜素+5-FU组能更明显地诱导肝癌细胞凋亡,降低Pgp和MRP-1蛋白表达水平(P<0.05)。结论大蒜素能够增强5-FU的抗肿瘤效果。其机制可能与大蒜素降低肝癌细胞内Pgp和MRP-1的表达,逆转耐药有关。大蒜素具有G2/M期细胞阻滞作用,可能与5-FU发生协同作用。