白藜芦醇对肿瘤坏死因子α诱导内皮细胞白细胞介素6及基因表达谱的影响

摘要

目的观察白藜芦醇对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)炎症因子的影响,并借助基因芯片技术及富集方法分析基因差异性表达情况,探讨白藜芦醇保护内皮功能的可能分子机制。方法应用体外HUVEC原代培养细胞,分别用10μg/L的TNF-α及加入不同浓度白藜芦醇刺激HUVEC后,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清液的炎症因子白细胞介素6(IL-6)和趋化因子单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的水平,改良Boyden室模型评估单核细胞迁移。采用全基因组表达谱芯片筛选白藜芦醇干预HUVEC后的差异表达基因,同时用富集分析方法进行基因本体(GO)、京都基因和基因组学百科全书(KEGG)通路分析可能的分子功能。结果未加任何药物处理的HUVEC产生的IL-6浓度为(165.1±151.4)ng/L,MCP-1浓度为(65.44±12.14)ng/L;10μg/L的TNF-α刺激HUVEC后IL-6浓度为(346.8±86.0)ng/L,MCP-1浓度为(98.82±26.83)ng/L;10μmol/L白藜芦醇干预细胞后IL-6浓度为(183.8±146.7)ng/L,MCP-1浓度为(62.57±19.51)ng/L;20μmol/L白藜芦醇干预后IL-6浓度为(117.0±83.1)ng/L,MCP-1浓度为(55.73±23.34)ng/L;提示白藜芦醇呈浓度依赖性抑制TNF-α刺激HUVEC后的IL-6和MCP-1的水平(P<0.05),同时白藜芦醇可明显减少单核细胞向内皮细胞的迁移(10μmol/L白藜芦醇降低了30%,20μmol/L白藜芦醇降低了80%,P<0.01)。与单用TNF-α刺激HUVEC相比,白藜芦醇预处理后有1604个基因表达上调,2157个基因下调。GO功能分析提示差异表达基因主要富集在化学物质应激反应、细胞外基质组织、结构组织、心血管系统发育、炎症反应等生物学过程。KEGG通路分析显示磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt),血小板活化信号通路受到影响。结论白藜芦醇可抑制内皮细胞的炎症反应,可能通过多条信号机制影响炎症因子和保护心血管系统。