表皮生长因子受体体外测活的非同位素方法

摘要

建立了一种表皮生长因子受体体外测活的非同位素方法．通过克隆表皮生长因子受体主要磷酸化位点 Ｔｙｒ１１７３周围 ２０肽的基因片段与谷胱甘肽 Ｓ－转移酶（ＧＳＴ）的融合蛋白作为底物，用抗磷酸化酪氨酸的单克隆抗体ＰＹ９９来检测其磷酸化的程度．此方法在专一性及灵敏度上都比已有方法有显著提高．融合蛋白的Ｋｍ值（１０ｍｏｌ／Ｌ）比合成多肽底物的Ｋｍ值（１１０ｍｏｌ／Ｌ）要低一个数量级．此方法还可用于测定 ｃ－ｅｒｂ Ｂ２（Ｎｅｕ／ＨＥＲ２）的酪氨酸激酶活力．