百合谷胱甘肽-S-转移酶基因(LotGSTL)的克隆及原核表达

摘要

采用RACE技术,克隆OT百合‘Robina’(Lilium OT hybrids’Robina’)中编码谷胱甘肽转移酶基因LotGSTL,对其进行了生物信息学分析,研究了该基因在不同组织中的表达特性,并对该基因进行原核表达。结果显示:该基因全长800 bp,ORF为717 bp,编码238个氨基酸。氨基酸序列比对及系统分析表明,该基因与拟南芥的两个Lambda类GST基因聚为一类,初步确定为百合Lambda类GST基因,命名为LotGSTL。生物信息学分析表明,LotGSTL蛋白含有典型的GST蛋白保守结构域,为亲水性蛋白,无跨膜结构,分子量为27 278.2 Da,理论等电点为5.2,分子式为C1257H1933N309O361S4,可能存在14个磷酸化位点。建立了稳定的LotGSTL1原核表达体系,原核表达的LotGSTL1蛋白大约为27 kD,与预测的蛋白相对分子量一致。分析了LotGSTL基因在不同器官中的表达模式,发现其在花、叶、根、鳞茎中表达量均较高,而茎中表达量较低,相对表达量依次为:花>叶>根>鳞茎>茎。该研究将为解析百合LotGSTL基因的抗逆功能提供帮助,对于未来百合抗逆分子育种的研究有所帮助。